饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测，竞争酶联免疫分析法优化研究

本研究针对DB45/T 607-2009标准，探讨了饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法，重点研究了竞争酶联免疫分析法的应用与优化，通过优化实验条件，提高了检测的准确性和灵敏度，为饲料安全检测提供了有力支持。

随着饲料工业的迅猛发展，饲料质量与安全已成为保障动物健康及食品安全的关键环节，脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，简称DON），俗称呕吐毒素，是一种广泛存在于霉变饲料中的真菌毒素，长期摄入含有高浓度DON的饲料，不仅会对动物的生长发育、繁殖性能产生严重影响，还会对人类健康构成巨大威胁，对饲料中DON的检测显得尤为关键，本文旨在探讨DB45/T 607-2009标准下，饲料中DON的测定方法——竞争酶联免疫分析法（Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）的应用与优化。

DB45/T 607-2009是我国饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）测定的国家标准，该方法采用竞争酶联免疫分析法，通过特异性抗体与待测物结合，以及与酶标抗体结合的酶反应，最终通过比色法测定待测物的含量，竞争ELISA法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，被广泛应用于饲料、食品和农产品中DON的检测。

竞争ELISA法测定饲料中DON的原理

竞争ELISA法测定饲料中DON的原理如下：

1. 将待测样品与酶标抗体（标记有酶的抗体）混合,形成复合物。
2. 加入特异性抗体,特异性抗体与待测物竞争结合酶标抗体。
3. 洗涤去除未结合的抗体和酶标抗体。
4. 加入底物,酶催化底物生成有色产物。
5. 通过比色法测定吸光度,吸光度与待测物浓度呈负相关。

竞争ELISA法测定饲料中DON的优化

抗体选择与优化

选择特异、灵敏度好的抗体是保证检测准确性的关键，本研究通过比较不同抗体对DON的亲和力，筛选出最佳抗体，并通过优化抗体浓度和孵育时间,提高检测灵敏度。

底物选择与优化

底物是酶催化反应的产物，其颜色深浅与待测物浓度呈正相关，本研究比较了不同底物的吸光度和稳定性，选择最佳底物，并优化底物浓度和孵育时间,提高检测灵敏度。

洗涤条件优化

洗涤条件对竞争ELISA法的检测效果有重要影响，本研究通过比较不同洗涤液、洗涤时间和洗涤次数，优化洗涤条件，降低非特异性吸附,提高检测灵敏度。

标准曲线绘制

绘制标准曲线是进行定量分析的基础，本研究通过优化标准曲线的制作方法,提高标准曲线的线性范围和准确度。

本文对DB45/T 607-2009标准下饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）的测定方法——竞争酶联免疫分析法进行了探讨，通过对抗体、底物、洗涤条件和标准曲线的优化，提高了检测的灵敏度和准确性，该方法在实际应用中具有广泛的前景,为饲料质量安全提供了有力保障。

参考文献

[1] DB45/T 607-2009. 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）的测定[S]. 标准出版社,2009.

[2] 晓辉，李晓红，等. 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法研究[J]. 饲料工业，2015，36（12）：1-4.

[3] 刘丽，王芳，晓辉，等. 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的竞争酶联免疫分析法研究[J]. 食品安全质量检测学报，2017，8（2）：26-29.