羊溶血性曼氏杆菌分离鉴定新规程DB15/T 2742-2022深度解读

《DB15/T 2742-2022 羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程详解》详细介绍了羊溶血性曼氏杆菌的分离与鉴定方法，包括样品采集、培养、分离纯化、生化鉴定等步骤，为兽医和微生物学领域提供科学、规范的实验操作指导。

羊溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica），一种常见的革兰氏阴性杆菌，主要侵害羊群，导致羊梭菌性败血症和肺炎等严重疾病，为了科学有效地预防和控制这一疾病，我国特地制定了《羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程》（DB15/T 2742-2022），以下将详细阐述该规程的核心内容，旨在为相关领域从业人员提供实用的指导。

适用范围

本规程广泛适用于羊溶血性曼氏杆菌的分离、纯化、鉴定以及保存工作，涵盖了兽医临床、动物疾病研究、动物防疫等多个领域的实验室实践。

操作规程

样品采集与处理

1. 收集羊只的血液、病变组织、分泌物等样本。
2. 采集样本后,应立即将其置于无菌容器中，并尽快送往实验室检测。
3. 对于血液样本,需严格遵循无菌操作，抽取一定量的血液，加入适量的无菌生理盐水，充分混合后，按照1:10的比例进行稀释。

分离培养

1. 将处理后的样本接种于含有5%绵羊红细胞（SRBC）的鲜血琼脂平板上。
2. 将平板放置于37℃的恒温培养箱中，培养24-48小时。
3. 观察菌落生长状况,挑选典型的菌落进行进一步的鉴定。

纯化培养

1. 将挑选出的典型菌落接种于鲜血琼脂平板上,重复纯化2-3次。
2. 将纯化后的菌株接种于营养琼脂斜面,并在4℃冰箱中保存。

鉴定

1. 形态学观察：在光学显微镜下观察菌体的形态和其它特征。
2. 生化试验：进行氧化酶试验、触酶试验、盐还原试验等。
3. 血清学试验：采用琼脂扩散试验或ELISA等方法，检测菌株与抗血清的反应。
4. 分子生物学鉴定：运用PCR、测序等技术对菌株进行分子鉴定。

保存

1. 将纯化后的菌株接种于营养琼脂斜面,存放在4℃冰箱中。
2. 对于长期保存,可以将菌株接种于肉汤中，加入适量的保护剂，并在-20℃冰箱中保存。

注意事项

1. 在整个操作过程中,必须严格遵守无菌操作原则，以防止污染。
2. 在样品采集、处理及接种过程中，需特别注意防止溶血现象的发生。
3. 在培养过程中,需密切关注菌落生长情况，及时调整培养条件。
4. 在鉴定过程中,确保各项试验的准确性，以保证鉴定结果的可靠性。
5. 在保存过程中,需防止菌株污染和变异。

《羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程》（DB15/T 2742-2022）为羊溶血性曼氏杆菌的分离、纯化、鉴定及保存提供了标准化的操作流程，遵循该规程有助于提升实验室检测水平，为羊溶血性曼氏杆菌病的防控工作提供坚实的科学支持。