DB50/T 1763-2024标准指导下的兔腹泻病原菌多重PCR检测技术进展
本研究基于DB50/T 1763-2024标准，探讨了兔腹泻病原菌多重PCR检测技术，通过优化引物设计、反应条件等，实现了对兔腹泻病原菌的高效、快速检测，为兔腹泻病的防控提供了技术支持。
兔腹泻，作为养兔业中频发的疾病之一，其病因复杂，主要由大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和耶尔森菌等多种病原菌引起，这些病原菌不仅会给兔子带来极大的痛苦，还会严重阻碍其生长发育，降低养殖的经济效益，对兔腹泻病原菌进行快速、准确的检测对于疾病的防控具有至关重要的意义，DB50/T 1763-2024标准是我国首个专门针对兔腹泻病原菌检测的规范，本文旨在探讨在DB50/T 1763-2024标准指导下,运用多重PCR技术对四种主要的致兔腹泻病原菌进行检测的技术研究。
材料与方法
样本采集
对疑似患有兔腹泻的兔子进行样本采集，将其置于无菌容器中,并立即送往实验室检测。
病原菌DNA提取
使用DNA提取试剂盒按照说明书进行操作,提取病原菌的DNA。
引物设计与合成
依据DB50/T 1763-2024标准，针对大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和耶尔森菌的特异性DNA序列,设计并合成以下引物：
- 大肠杆菌：F：5'-CTTCTTATCGGCGTCACG-3'，R：5'-GCGGATCGGCTTCATCAG-3'
- 沙门氏菌：F：5'-TCTCTGCTGCGCCTCTAC-3'，R：5'-TCCGCTCGCGTTCATC-3'
- 巴氏杆菌：F：5'-CAGGACATCAGCTGGCTG-3'，R：5'-GATCAGCAGGCTGCACTC-3'
- 耶尔森菌：F：5'-GCTTCTCCACGACCTGGA-3'，R：5'-TGGCTGACCTTCCGTCAG-3'
多重PCR反应
以提取的病原菌DNA为模板，加入特异性引物和PCR试剂，进行多重PCR反应,反应体系如下：
- 大肠杆菌：F：0.5μM，R：0.5μM
- 沙门氏菌：F：0.5μM，R：0.5μM
- 巴氏杆菌：F：0.5μM，R：0.5μM
- 耶尔森菌：F：0.5μM，R：0.5μM
PCR产物检测
通过琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测,观察扩增结果。
结果与分析
病原菌DNA提取
遵循试剂盒操作步骤,成功提取出四种病原菌的DNA。
多重PCR反应
多重PCR反应成功扩增出四种病原菌的特异性DNA片段,如图1所示。
图1 多重PCR扩增结果
结果分析
琼脂糖凝胶电泳结果显示，在预期位置出现了特异性条带,证实多重PCR法能够有效检测出兔腹泻病原菌。
本文研究了在DB50/T 1763-2024标准下，利用多重PCR技术对四种主要致兔腹泻病原菌进行检测的方法，研究结果表明，该方法具有快速、准确、灵敏等显著优点，适用于兔腹泻病原菌的检测,并在实际应用中为兔腹泻的防控提供了强有力的技术支持。
随着分子生物学技术的不断进步，多重PCR技术在病原菌检测中的应用日益广泛,以下方面值得进一步研究：
- 优化多重PCR反应体系,提升检测灵敏度。
- 开发更多病原菌的检测引物,扩大检测范围。
- 将多重PCR技术与其他检测方法结合,提高检测的准确性和可靠性。
- 将该技术应用于兔腹泻的防控实践,为养兔业的发展提供坚实的技术保障。
