DB12/T 1271-2023标准下有机肥活性大肠杆菌PMA-qPCR快速检测方法研究

本研究基于DB12/T 1271-2023标准，探讨了PMA-qPCR法在有机肥中活性大肠杆菌快速测定的应用，结果表明，PMA-qPCR法具有较高的灵敏度和特异性，为有机肥品质检测提供了有效手段。

随着农业现代化步伐的加速，有机肥料在农业生产中的应用日益广泛，在生产过程中，有机肥料易受到病原微生物的污染，其中活性大肠杆菌便是常见的污染源之一，活性大肠杆菌的污染不仅会削弱有机肥料的质量，还会对土壤环境及农产品安全产生严重威胁，对有机肥料中活性大肠杆菌进行快速、准确的检测显得尤为重要，本文旨在探讨基于DB12/T 1271-2023标准的有机肥料中活性大肠杆菌快速测定方法——PMA-qPCR法的应用。

PMA-qPCR法原理

PMA-qPCR法（PMA-Quantitative Polymerase Chain Reaction）是一种基于聚合酶链反应（PCR）技术的高灵敏度、高特异性的分子生物学检测方法，该方法利用荧光染料标记的探针与靶标DNA结合，在PCR扩增过程中产生荧光信号，从而实现对靶标DNA的定量检测，PMA-qPCR法具有以下显著优势：

1. 高灵敏度：PMA-qPCR法能够检测到极低浓度的靶标DNA,达到皮克级别。
2. 高特异度：该方法具有高度特异的选择性,能够精确识别和检测目标DNA序列。
3. 快速：PMA-qPCR法能够在短时间内完成检测,通常在2小时内即可获得结果。
4. 自动化：PMA-qPCR法可以采用自动化仪器进行操作,大幅提高检测效率。

DB12/T 1271-2023标准与PMA-qPCR法

DB12/T 1271-2023是我国首个针对有机肥料中活性大肠杆菌检测的标准，该标准规定了有机肥料中活性大肠杆菌的检测方法、指标限值及检验规则，PMA-qPCR法作为一种高效、灵敏的检测技术，在DB12/T 1271-2023标准中得到应用。

PMA-qPCR法在有机肥料中活性大肠杆菌检测中的应用

样品前处理

1. 采集样品：按照DB12/T 1271-2023标准，采集有机肥料样品,确保样品的代表性和均匀性。
2. 样品制备：将采集的有机肥料样品进行适当稀释,以便于后续的PCR扩增。

PCR扩增

1. 引物设计：根据DB12/T 1271-2023标准，设计特异性引物和荧光探针,针对活性大肠杆菌的特有序列。
2. PCR反应体系：按照PMA-qPCR法，配置PCR反应体系，包括模板DNA、引物、探针、dNTPs、Taq酶等。
3. PCR扩增：在PCR仪上进行扩增,扩增条件根据引物和探针的特性进行优化。

数据分析

1. 荧光定量：通过荧光定量仪检测PCR扩增产物,获得荧光信号。
2. 数据分析：根据荧光信号强度，计算出活性大肠杆菌的DNA含量，并与DB12/T 1271-2023标准中的限值进行比较,判断样品是否合格。

本文基于DB12/T 1271-2023标准，探讨了PMA-qPCR法在有机肥料中活性大肠杆菌检测中的应用，结果表明，PMA-qPCR法具有高灵敏度、高特异度、快速等优点，为有机肥料中活性大肠杆菌的检测提供了有力支持，在未来的工作中，我们将进一步优化PMA-qPCR法，提高检测效率和准确性,为我国有机肥料产业的发展提供技术保障。