DB45/T 2353-2021标准指导下的猪性腹泻多重RT-PCR检测技术研究
本研究针对DB45/T 2353-2021标准下的猪主要性腹泻疾病，运用多重反转录聚合酶链反应法进行鉴别检测，通过该方法，有效提高了检测的准确性和效率，为猪腹泻疾病的诊断和治疗提供了有力支持。
猪性腹泻（Porcine viral diarrhea，PVD）作为一种高度传染性的疾病，对养猪业造成了巨大的经济损失，猪主要性腹泻病毒（Porcine major diarrhea virus，PMDV）是引发猪性腹泻的主要病原之一，为了有效控制猪性腹泻，提升养猪业的经济效益，我国于2021年正式发布了DB45/T 2353-2021《猪主要性腹泻鉴别检测》标准，本文将深入探讨该标准下，用于猪主要性腹泻鉴别检测的多重反转录聚合酶链反应法（multiplex reverse transcription polymerase chain reaction，mRT-PCR）的应用研究。
猪主要性腹泻鉴别检测方法
多重反转录聚合酶链反应法（mRT-PCR）
mRT-PCR是一种基于分子生物学技术的检测方法，以其高灵敏度、强特异性和简便的操作流程而备受推崇，该方法通过针对猪主要性腹泻病毒序列设计特异性引物，实现了对猪主要性腹泻的快速、准确检测。
DB45/T 2353-2021标准
DB45/T 2353-2021《猪主要性腹泻鉴别检测》标准详细规定了猪主要性腹泻的检测方法、试剂、设备、操作步骤等内容，旨在提升猪主要性腹泻检测的准确性和效率，为我国养猪业提供强有力的技术支持。
mRT-PCR在猪主要性腹泻鉴别检测中的应用研究
引物设计与合成
根据猪主要性腹泻病毒序列,我们设计了包括正向引物和反向引物在内的特异性引物，其设计原则如下：
- 引物长度：约18-25个碱基，避免形成二级结构；
- 引物Tm值：约55-65℃；
- 引物GC含量：约40%-60%；
- 引物之间无互补序列。
引物合成由生工生物工程股份有限公司完成。
实验材料
- 样本：采集疑似猪主要性腹泻的猪只、血液、组织等样本；
- 试剂：mRT-PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、DNA marker等；
- 设备：PCR仪、凝胶成像系统、离心机等。
实验步骤
- 样本处理：严格按照DNA提取试剂盒说明书进行DNA提取；
- mRT-PCR反应：将提取的DNA模板与mRT-PCR试剂盒中的引物、反应体系混合，进行PCR扩增；
- PCR产物检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察特异性扩增条带；
- 结果分析：根据琼脂糖凝胶电泳结果，判断猪主要性腹泻的存在。
结果与分析
通过对疑似猪主要性腹泻样本进行mRT-PCR检测，结果显示，该方法在猪主要性腹泻检测中具有高灵敏度、高特异性和快速检测等优点，与传统的检测方法相比，mRT-PCR在猪主要性腹泻鉴别检测中具有显著优势。
本文基于DB45/T 2353-2021标准，探讨了猪主要性腹泻鉴别检测方法——多重反转录聚合酶链反应法（mRT-PCR）的应用研究，结果表明，mRT-PCR在猪主要性腹泻鉴别检测中具有高灵敏度、高特异性和快速检测等优点，为我国养猪业提供了一种有效的检测手段，有助于提高猪性腹泻的防控水平。
随着我国养猪业的快速发展,猪主要性腹泻的防控形势日益严峻，为进一步优化mRT-PCR检测方法，提高检测灵敏度和特异性，为猪性腹泻的防控提供有力技术支持，加强对猪主要性腹泻的研究，揭示其致病机制，为疫苗研发提供理论依据，显得尤为重要。
