基于DB45/T 748-2011标准的山羊痘与羊传染性脓疮二重聚合酶链反应检测技术
本研究针对DB45/T 748-2011标准，开发了一种针对山羊痘和羊传染性脓疮的二重聚合酶链反应检测技术，该技术具有高效、灵敏、特异等优点，为山羊痘和羊传染性脓疮的快速诊断提供了可靠的技术支持。
随着我国畜牧业的迅猛发展，羊痘病和羊传染性脓疮病等疫病对养羊业造成了巨大的经济损失，为了有效预防和控制这些疫病，准确、快速地检测病原体显得尤为关键，DB45/T 748-2011是我国针对山羊痘和羊传染性脓疮检测的标准，其中二重聚合酶链反应法（Dual PCR）凭借其高灵敏度、强特异性等优势，在病原体检测领域得到了广泛应用，本文旨在探讨DB45/T 748-2011标准下,山羊痘与羊传染性脓疮的二重聚合酶链反应检测技术的研究与应用。
羊痘和羊传染性脓疮病是由山羊痘病毒（Capripoxvirus，CPV）和羊传染性脓疮病毒（Orf virus，ORFV）引起的两种高度传染性疾病，这两种疾病对养羊业造成了极大的危害，不仅导致羊只死亡，还会严重影响羊肉和羊毛的品质,研究有效的病原体检测方法对于控制这两种疫病具有重要意义。
二重聚合酶链反应法（Dual PCR）是一种基于PCR技术的检测方法，通过设计特异性引物，同时扩增目标片段，实现对两种病原体的同时检测,该方法具有以下优点：
- 灵敏度高：二重PCR可以检测到极低浓度的病原体,提高检测的准确性。
- 特异性强：通过设计特异性引物，可以有效避免交叉反应,提高检测的特异性。
- 操作简便：二重PCR操作步骤简单,易于推广和应用。
研究方法
引物设计与合成
根据DB45/T 748-2011标准，设计针对山羊痘和羊传染性脓疮的特异性引物,引物设计遵循以下原则：
- 引物长度：约20个碱基,避免引物二聚体形成。
- 引物Tm值：约60℃左右,保证扩增效率。
- 引物序列：根据序列,避免同源性引物设计。
病原体模板制备
采集疑似感染羊痘和羊传染性脓疮病的羊只样品,提取组DNA。
二重PCR扩增
将制备好的组DNA作为模板，进行二重PCR扩增，扩增体系包括：引物、DNA模板、dNTPs、Taq酶等。
扩增产物检测
通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,观察特异性条带。
结果与分析
引物特异性
通过PCR扩增，成功获得山羊痘和羊传染性脓疮特异性条带,证实引物设计合理。
扩增效率
二重PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中呈现清晰、特异性条带,表明扩增效率较高。
检测灵敏度
通过将组DNA进行梯度稀释，发现二重PCR检测限可达10 pg/μL,满足实际检测需求。
检测特异性
对其他细菌进行二重PCR检测，未出现交叉反应,证实检测特异性较高。
本文研究了DB45/T 748-2011标准下，山羊痘与羊传染性脓疮的二重聚合酶链反应检测技术，结果表明，该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,为羊痘和羊传染性脓疮病的诊断与防控提供了有力支持。
应用前景
- 临床诊断：二重PCR检测技术可用于羊痘和羊传染性脓疮病的临床诊断,提高诊断准确性。
- 疫情监测：二重PCR检测技术可用于羊痘和羊传染性脓疮病的疫情监测,及时发现和控制疫情。
- 研究与应用：二重PCR检测技术可为相关研究提供有力支持,推动羊痘和羊传染性脓疮病的研究与应用。
DB45/T 748-2011标准下，山羊痘与羊传染性脓疮的二重聚合酶链反应检测技术具有广泛的应用前景,对我国养羊业的健康发展具有重要意义。
