DB45/T 248-2005猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测操作规程解析

《DB45/T 248-2005 聚合酶链反应检测猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌的技术操作规程详解》详细介绍了聚合酶链反应（PCR）技术在检测猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌中的应用，包括试剂准备、样品处理、PCR反应步骤等，为临床诊断提供可靠的技术支持。

随着我国畜牧业的迅猛发展,猪接触传染性胸膜肺炎（APP）已逐渐成为养猪业的一大威胁，APP，即猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌感染，其临床表现为发热、呼吸困难、食欲减退等症状，严重时甚至危及生命，为了有效遏制APP的传播，我国制定了DB45/T 248-2005标准，其中详细规定了聚合酶链反应（PCR）检测猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌的技术操作规程，本文将对该规程进行详细解析，以指导相关技术人员准确操作。

聚合酶链反应（PCR）是一种体外扩增特定DNA序列的高效技术，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等显著优势，DB45/T 248-2005标准针对PCR检测猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌的技术操作规程进行了详细规定，旨在为技术人员提供一套可靠的检测方法。

材料与试剂

1. 样品：疑似APP感染猪的肺组织、血液、分泌物等。
2. 试剂：PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、DNA模板、引物、荧光标记的DNA分子量标准等。
3. 仪器：PCR仪、高速离心机、电泳仪、凝胶成像系统等。

操作步骤

样品处理

1. 取适量疑似APP感染猪的肺组织、血液、分泌物等，用无菌生理盐水清洗，无菌操作下剪碎，加入适量DNA提取试剂，充分混匀。
2. 将混合液在高速离心机上离心,取上清液作为DNA模板。

PCR反应

1. 按照PCR试剂盒说明书配置反应体系。
2. 将DNA模板加入反应体系中,进行PCR扩增。
3. PCR扩增程序：预变性95℃ 5分钟，变性95℃ 30秒，退火60℃ 30秒，延伸72℃ 1分钟，共35个循环。

结果分析

1. 将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察扩增结果。
2. 以荧光标记的DNA分子量标准为参照,分析扩增产物的分子量。
3. 根据DB45/T 248-2005标准，判断疑似APP感染猪是否为APP阳性。

注意事项

1. 操作过程中严格无菌操作,避免污染。
2. 样品处理过程中,注意避免DNA降解。
3. PCR反应过程中,严格控制温度和时间，确保扩增效果。
4. 结果分析时,注意排除假阳性结果。

DB45/T 248-2005标准规定的聚合酶链反应检测猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌的技术操作规程，为相关技术人员提供了一套可靠的检测方法，在实际操作过程中，严格按照规程进行，有助于提高检测的准确性和可靠性，为我国养猪业的发展提供有力保障。